其实,铲屎官们在给自己的狗狗打完狂犬疫苗后,往往忽略了一件非常重要的事——抗体检测!由于动物的个体差异等原因,疫苗免疫通常有少数狗狗会出现免疫失败的情况,如果不进行抗体检测,宠主们是无法知道疫苗究竟有没有使汪星人产生抗体的。对狂犬病比较恐惧的宠主们,一定不要忘了给家里的汪星宝宝检测一下抗体哦!下面小编整理了一些狂犬病毒抗体检测的相关知识,感兴趣的宠主们可以了解一下! 小鼠中和试验(MNT) 原理: 用变量的被测血清在体外中和恒量狂犬病毒,一定时间后注射小鼠脑内,最后根据14~21天内小鼠的死亡情况和标准参考血清比较,按Reed & Muench 方法计算待检血清的中和单位。 1、对试验条件要求比较低。 2、耗时长,操作较繁琐。 3、需大量的试验小鼠,成本高。 4、操作手法,动物间的个体差会影响试验结果。 快速荧光斑点抑制试验(RFFIT) WHO推荐检测方法 原理: 根据中和试验原理,采用一定量的病毒与系列稀释的抗血清相中和,残留的病毒感染力通过接种细胞,用RFFIT检测其剩余病毒量,根据中和效价公式计算结果。 1、可定量检测狂犬病毒中和抗体效价,重复性好。 2、耗时较短,可用于精确定量的快速诊断。 3、需专门技术培训,操作较繁琐,需荧光显微镜。 4、读数困难,价格较贵。 5、受主观因素影响较FAVN大,一般用于人接种疫苗后血清样品的抗体水平鉴定。 酶免疫吸附法(ELISA) 原理: 通过吸附抗原有全病毒颗粒、纯化的狂犬病毒糖蛋白以及纯化的狂犬病毒核衣壳蛋白(RNP),并以过氧化物酶标记的抗抗体作为标记抗体,即可检测人及不同动物血清中的抗狂犬病毒抗体。 1、只需简单的实验室设备,尤其适合检测大量的血清样品,且在很短的时间内即可出结果。 2、与MNT有较好的相关性,在小鼠饲养及组织培养不具备的实验室里,ELISA可视为MNT的替代方法。 3、严格地讲,ELISA实验并没有测定真正的中和抗体,所测抗体为几乎所有的与包被板上抗原结合的IgG抗体,包括一些非特异性抗体,所以其结果不用国际单位(IU/ml)表示,而是用等价单位(EU/ml)表示。 斑点免疫结合法(DIA) 原理:将抗原点缀在硝酸纤维素条或片上,血清涂在吸收性纸条上。用酶结合的抗球蛋白检测抗原-抗体复合物和显色的不溶性底物。主要用于检测人血清中狂犬病毒抗体,其结果与RFFIT具有可比性,但须稍作改进以检测狂犬病毒中和抗体水平。该方法只需一滴血、仅30-40分钟即可出结果。 快速凝集法(RAT) 原理:狂犬病抗体能特异性地凝集狂犬病病毒致敏的胶乳珠。以抗原致敏乳胶,可检测2.5IU/ml以上的抗体水平, RAT与MNT符合率达97%以上。 间接免疫荧光法(IFA) 原理:以狂犬病毒感染细胞,制成细胞片,用间接免疫荧光法检测血清中狂犬病毒抗体。但该方法只能作半定量测定抗狂犬病毒抗体,其灵敏度随待测血清的稀释度增加而降低,同时与细胞片制备过程中病毒接种的量及感染时间长短有关。 荧光抗体病毒中和试验法 (FAVN) 原理: 在有国际标准阳性血清对照的情况下,先在96孔板上对血清进行系列稀释,每个稀释度4个重复;每个孔内加入病毒CVS-11,37℃中和60min后,加入BHK-21细胞,培养48h后,对单层细胞采用荧光标记抗体进行染色,通过标准血清和待测血清在50%的细胞孔中使100%病毒中和的稀释度,计算待测血清的抗体效价。 有了这些标准的抗体检测方法,铲屎官们再也不怕小宝贝由于抗体不够或免疫失败等情况生病啦!另外还有一个好消息告诉大家,科前生物最新推出的狂犬疫苗“科旺优”已经上市啦,并且打完疫苗后还可以提供世界动物卫生组织(OIE)推荐的FAVN法抗体检测服务哦!! 想要了解更多干货,请扫描下方二维码关注公众号,寒冷的冬天有了大家的关注而变得格外温暖~~