猫的疫苗接种和抗体检测（文献翻译）

   1、介绍   

由猫病咨询委员会（ABCD）发布的疫苗接种指南，旨在指导医生对单个动物和一类动物提供免疫程序。在初次接种疫苗后，建议根据感染风险，每1-3年重新接种一次FCV和FHV的疫苗，每3年重新接种一次FPV的疫苗。疫苗接种间隔由疫苗厂家进行的最小免疫持续时间（DOI）实验所决定。然而，小猫多大年龄可以成功接种疫苗（因为母源抗体持续时间不同）和疫苗诱导的DOI持续时间方面存在个体差异。此外，临床猫的免疫效果可能比实验室条件下确定的DOI要长得多。此外，猫可能经历了亚临床感染，即使没有免疫疫苗，也可能受到终身保护。此外，不同个体的免疫反应和DOI由于年龄、营养状况、并发的亚临床感染和品种可能会有所不同。抗体检测可以避免不必要的免疫接种，帮助确定单个动物的最佳免疫程序。然而，在解释抗体检测和抗体滴度时，区分主动或被动获得的抗体是很重要的。被动获得的抗体的滴度通常只持续数周，但可以用保护滴度进行定量解释，但主动获得的抗体却不是这样。在感染或接种后，抗体和细胞免疫反应通过激活T细胞和形成记忆细胞来诱导。如果产生抗体，无论抗体的滴度如何，都表明已经诱导一种免疫反应。

活疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫（CMI）。CMI在控制病毒等细胞内病原体中起着重要作用。然而，攻毒保护实验提供了极好的数据，表明疫苗诱导的抗体滴度与对某些疾病的保护之间也存在良好的相关性。抗体滴度作为一种免疫指标，已被证明对犬瘟热病毒（CDV）、犬腺病毒（CAV）-1、犬细小病毒（CPV）-2、犬狂犬病疫苗以及FPV和猫狂犬病这些核心疫苗是有效的。然而，对于狂犬病毒疫苗接种，许多国家和地区将接种疫苗立法，因此，不需要定期进行抗体检测来确定是否需要接种疫苗。对于其他一些可通过疫苗预防的疾病，如由FCV和FHV引起的疾病，抗体滴度和保护之间并无相关性，抗体的作用也尚不清楚。对FCV的保护已被证明与中和抗体（VNAs）和CMI相关。虽然检测不到猫咪FCV的中和抗体，细胞免疫仍可以预防FCV感染。粘膜IgA水平比血液中抗体水平具有更强的保护相关性，但粘膜抗体水平（IgA）不能轻易测量。此外，由于FCV菌株的易变异的特性，抗体检测在保护性方面的价值较为有限的。由于缺少交叉保护性，FCV实验室菌株的中和抗体滴度可能和临床毒株的保护性无关。

对于FHV感染，如其他α疱疹病毒感染，细胞免疫比体液免疫保护性更好；然而，细胞免疫反应只能通过复杂的实验室方法来测量。有研究表明，血清抗体检测对FHV感染的保护作用无效。接种过疫苗的猫体内没有血清抗体，但这不意味着猫就会患病。此外，作为呼吸道的病原体，粘膜细胞保护和体液保护在保护猫免受FHV感染方面也很重要。

对于FeLV感染，大多数在野毒感染后(但通常在接种疫苗前)发生过病毒血症的猫体内可以检测到高水平的中和抗体，表明其具有保护作用，尽管细胞毒性t淋巴细胞也非常重要最近一项关于退行性或进行性FeLV感染的猫的体液免疫反应的研究结果也支持了中和抗体在保护中的作用。中和抗体仅在退行性感染的猫中检测到，与进行性感染的猫相比，这些猫对表面蛋白（gp70）也表现出更高的FeLV抗体反应。

中和抗体达到保护线的猫咪对FeLV免疫，这说明中和抗体的检测是有用的，当中和抗体达到保护线后，可以不接种疫苗。然而，中和抗体的检测并没有广泛应用。最近，欧洲出现了一种新的FeLV抗体检测方法。这是一种测量FeLVp15E（包膜跨膜蛋白）抗体的即时测试。这个新测试是基于一项针对不同FeLV抗原的抗体评估检测诊断效用的研究结果。FeLV p15E的重组制剂被鉴定为一种潜在的有用的抗原，用于检测可能与保护相关的抗体。然而，这种新的即时测试在预测对FeLV感染的保护方面的价值仍有待评估，目前尚不清楚抗p15e抗体的存在与临床对FeLV感染的保护之间的相关性。

由于FPV的抗体滴度与疾病保护之间的良好相关性，本综述的重点将是在接种疫苗的背景下检测FPV抗体。血清样本中抗体水平可以通过将样本发送到外部实验室来进行，或通过可在临床中使用的即时检测来进行(即实验室检测和临床检测)。

2.FPV的抗体和保护   

FPV疫苗研究结果表明，免疫后，抗体持续时间远远超过3年；在一些动物中，抗体可以终生维持。由于FPV疫苗的最小免疫时间长，具有足够抗体的猫将对3年1次的加强接种没反应，因此，这些动物没必要每三年接种疫苗。只有没有或抗体滴度很低的猫才能从疫苗接种中获益。在这方面，目前FPV指南中建议的3年加强间隔，仅仅是为了通过确保所有未受保护的猫接种疫苗来维持群体免疫。对于单只猫，抗体水平可以使用金标准检测或临床检测试剂盒来确定，以决定是否需要（再）接种疫苗。金标准检测可以提供精确的抗体滴度，而临床检测试剂盒只能提供定性结果（存在或不存在）或半定量结果（高、中、低或无抗体）。

2.1 金检测标准

抗体是通过结合病毒表面的蛋白来防止细胞的感染。这些抗体对于预防像FPV这样的系统性感染特别重要，它们的水平可以在诊断实验室中通过病毒中和试验（VN）或血凝抑制（HI）检测来确定。这些试验被认为是测定血清中保护性抗体滴度的金标准方法。

抗体滴度是通过连续稀释血清样本，然后添加到标准量的病毒中。在特定的孵育时间后，将病毒-抗体混合物接种到细胞培养物上或添加到红细胞中。滴度被定义为防止细胞感染（VN）或红细胞凝集(HI试验）的最高稀释度的倒数值。

2.2即时测试板

不同兽医诊所有不同的即时检测方法。这些测试是基于ELISA，并且一些测试的结果已被验证为金标准。在一次即时测试中，通过固相点ELISA，最多能检测12个样品的FPV、FCV和FHV的抗体。通过比较测试点与对照组的色调，可以读取出结果，从而给出半定量的结果。关于该检测的敏感性和特异性的数据由生产该检测的商业公司提供，并也发表在两项独立的研究中。在一项对收容所猫的研究中，该检测试剂盒显示了99%的特异性和49%的敏感性。Mende等人在对该测试进行修改以提高灵敏度后发表了一项研究的结果。在这项研究中，临界滴度为20的HI滴度时，该测试显示特异性89%，敏感性79%；之所以选择这个临界值，是因为接种过疫苗或已克服活动性感染的成年猫的临界值≥20被认为具有保护作用。 在另一项研究中，如果猫的HI滴度为40，则被认为是不受FPV的保护。在临界值为40时，该方法的特异性为86%，敏感性为83%。为了识别那些抗体水平不足且因此需要接种疫苗的猫，特异性是更重要的参数，因为它决定了被正确识别的阴性检测的百分比。重要的是要尽量减少假阳性结果的数量，因为假阳性检测结果的猫不会加强免疫，而且可能不会受到保护。假设滴度为20是具有保护性的，则该特异性被认为是可以接受的。如果该测试用于抗体阳性动物预期高流行率的群体的猫，则阳性预测值很高，并且该测试被被认为适合用于兽医临床，例如用于已知接种疫苗或有感染史的成年猫。

最近出现的新的实时检测方法只能检测针对FPV（而不是FCV或FHV）的抗体，它们基于免疫层析原理，通常可以提供定性结果(例如, 在较短的时间内给出受保护或不受保护的结果，而不是特定的抗体滴度)。迄今为止，这些测试尚未在独立研究中进行评估。

3.FPV实时抗体检测应用    

3.1测定接种疫苗后的FPV抗体反应

在小猫出生后的前几个月中进行了最初一系列的疫苗接种后，疫苗诱导的保护可以通过即时测试来确定。由于最后一次接种通常在12-16周左右进行，20周时获得的抗体试验呈阳性，结果表明动物产生了积极的免疫反应。在这个年龄，大多数动物的母源抗体（MDA）预计已经下降到

非常低或无法检测到的滴度。根据WSAVA疫苗接种指南，如果最后一次疫苗在16周龄时接种，并在20周龄时显示有保护，可以不用间隔12个月加强免疫，而是直接参加三年一次的FPV疫苗接种。关于免疫系统成熟的年龄，以及在16周时诱导的免疫反应的质量是否与成年动物一样好，目前还没有太多的数据。因此，建议每年对这些动物进行抗体检测似乎是有效的，而不是直接进行三年期的疫苗接种计划，特别是如果最后一针疫苗是在16周龄之前接种的。20周时FPV抗体阴性的小猫应该重新接种疫苗，3-4周后再次检测，以确定是否产生了抗体。如果抗体仍然没检测到，那么小猫是很有可能对特定的FPV抗原无反应，可能终身易感染。

3.2检测FPV疫苗接种是否有必要

每三年一次的FPV疫苗接种是基于最小的抗体持续时间。由于许多接种疫苗的动物保护性抗体滴度能持续超过3年，有时甚至终身保护，三年一次的抗体检测可以作为常规加强疫苗接种的替代方法。重新接种疫苗被证明无益，特别是对抗体滴度高的猫。对于有未知疫苗接种史或已接种疫苗的成年猫，可以通过抗体检测来判断是否需要接种疫苗。所以，这就需要提供单价FPV疫苗，以允许对特定疫苗的不同管理，但并非所有国家都是如此。

对于以前经历过严重的疫苗不良反应的动物，应仔细评估重新接种疫苗的必要性。这也适用于核心疫苗和非核心疫苗。对于FPV疫苗，可以根据FPV 即时抗体检测阳性的结果作出此决定。另一种可以通过抗体测量来确定疫苗接种要求的情况是，免疫功能低下的猫（见欧洲猫类疾病咨询委员会关于免疫功能低下的猫的疫苗接种的指南）

3.3控制救助中心中的FPV感染和爆发

如果可能的话，动物也可以在进入流浪救助中心之前进行FPV抗体测试，以确定它们是否受到抗体保护。如果抗体水平不够，动物应该接种疫苗并严格隔离，或者最好在进入流浪救助中心之前送到寄养家庭提高免疫力。然而，人们认识到在流浪救助中心，由于额外的费用，常规抗体筛选可能不合适；因此，往往是在进入后尽快选择接种疫苗。

3.4确定小猫FPV第一针疫苗接种的最佳年龄

3.4.1 母源抗体的获得

在胚胎时期，小猫会受到母源抗体的保护。猫有一个内皮绒膜性胎盘，这是免疫球蛋白的屏障，阻止它们从母体血清进入胎儿循环。一般认为，只有多达5-10%的母源抗体在怀孕期间从母猫转移到胎儿。克劳斯等人于2006年发现182只新生小猫在分娩时均未检测到血清IgG或IgA水平。这证实了在猫中，绝大多数抗体是通过初乳转移到后代的，初乳含有胰蛋白酶抑制剂，可以保护免疫球蛋白在新生儿胃肠道中降解。初乳中主要的免疫球蛋白类是IgG，它在母猫的乳腺中浓缩了2-5倍。

哺乳动物新生儿从肠腔内吸收完整的初乳免疫球蛋白进入循环。然而，这种能力迅速下降，通常在出生后24小时停止。一只新生的小猫能够在出生的前16小时内最有效地吸收免疫球蛋白。初乳中的抗体水平越高，小猫就越有可能从母亲那里获得足够水平的抗体。母源抗体的转移是如此有效，以至于一些小猫比它们的母亲获得更高水平的循环抗体。

有几个因素会影响母源抗体向新生儿的转移，导致小猫的低丙种球蛋白血症，如哺乳期延迟和出生后16-24小时内初乳摄入量差。因此，孤儿或之前被排斥哺乳的小猫咪（以及那些在哺乳前为了防止新生儿溶血而被隔离的小猫）会面临风险，以及来自同窝猫咪数量多、小或弱的新生儿，以及不能产生足够免疫球蛋白含量的初乳的母猫的幼崽。母源抗体转移失败会导致脓毒症或其他严重感染的高风险，并在生命的前两周内死亡。16-24小时的小猫低丙种球蛋白血症可以通过肌注或腹腔注射健康的、适当接种过疫苗的猫的3-5ml血清。最好与受影响的小猫生活在相同的环境中。用马IgG替代猫血清的尝试没有成功。

免疫球蛋白不仅存在于初乳中，也存在于母猫的奶中。然而，这些物质并不是来自于母亲的血清，而是在母猫乳腺中产生的。这种产乳免疫在后代的黏膜表面提供了局部保护，特别是在胃肠道，并且似乎在断奶之前发挥着保护作用。这些分泌性免疫球蛋白也存在于初乳中，并在被释放回粘膜表面之前被吸收到新生儿的循环中。

3.4.2 母源抗体保护持续时间

被动获得的循环免疫球蛋白提供即时的系统保护，这是必不可少的。和所有哺乳动物一样，猫的被动免疫非常有效，但持续时间很短。循环中的母源抗体被新生儿分解代谢，因此其浓度随着年龄的增长而逐渐降低。小猫的血清IgG水平从第2天的峰值持续下降，在4-5周和16周或以上之间达到最低点。这种消除的时间在很大程度上依赖于初乳摄取后新生儿循环中的初始母源抗体水平、环境因素和各自的抗原。因此，在母源抗体提供的保护时期，小猫之间（甚至同窝幼崽之间）有很大的差异。

FPV的母源抗体消除期已被评估为8-14周，尽管最近的研究表明母源抗体可以持续到16甚至20周。作为对照，猫冠状病毒（FCoV）4-6周，FeLV和FHV 6-8周，FCV 10-14周，猫免疫缺陷病毒（FIV）12周。

3.4.3 在幼时主动免疫接种

一旦母体抗体下降到无保护性的水平，小猫就需要接种疫苗，以诱导积极的免疫反应。人们普遍认为，与大多数哺乳动物相似，小猫从出生起就能对抗原产生免疫反应，但与成年动物相比，这种反应是有缺陷的，除非免疫系统是成熟的。研究表明，与成年动物相比，不到10周龄的小猫在刺激后产生的IL-2要低得多。免疫系统成熟的另一个例子是小猫对猫白血病病毒（FeLV）感染的年龄相关抗性的发展。实验性感染导致100%的新生猫咪发生持续病毒血症和felv相关疾病， 2周至2个月接种的小猫感染占85%，但4个月或1岁的猫感染仅占15%。

母源抗体可以保护动物免受感染，但也会干扰接种疫苗后的抗体产生。只有当针对各自抗原的母源抗体水平降低到抑制阈值以下时，非常年幼的小猫才能对接种疫苗产生有效的抗体反应。母源抗体的水平与不同窝小猫和母猫初乳有关，这取决于母猫初乳的抗体水平和初乳的数量。因此，通常的做法是在8-9周龄时进行第一次核心疫苗接种(对于有特殊风险的小猫或救助收容所的小猫，接种时间可以更早)，并每隔2- 4周进行一次额外的疫苗接种，直到12-16周龄或更大年龄，期望其中一次疫苗接种将在MDA阻断作用后和暴露于致病性病原体之前能起作用。有了这种策略，如果小猫仍然有干扰母源抗体或如果小猫已经对早期的疫苗（或感染）有反应，那是因为已经免疫了。

为了避免这个问题，在理想条件下，将通过建立每只小猫的抗体滴度来确定第一次核心疫苗接种的最佳年龄，以避免母源抗体的干扰。然而，在这种情况下使用抗体检测的情况尚未得到严格的评估。如果使用不提供滴度而只有半定量结果的即时测试，小猫可能需要每2-3周重新测试一次，因为接种疫苗的最佳时间点可能不能由6-8周龄时的单个血液样本来确定。人们认识到，每2-3周对幼崽小猫进行反复采血是困难的，对小猫也会产生潜在的压力，而且成本高昂，这妨碍了在实践中常规采用这一程序。

目前缺乏确定疫苗接种将导致主动免疫的母源抗体水平的数据。此外，在母源抗体存在的情况下，可以预期现有疫苗的性能存在差异。在使用抗体检测来决定首次接种疫苗的最佳年龄时，鉴于结果的精确度差异，诊断实验室得出的滴度优于 POC 检测的半定量结果。然而，在这种情况下，抗体检测仍然很昂贵，而且往往是不切实际的。

根据母猫的抗体滴度和MDA的平均半衰期(FPV MDA为9.5天)，也可以计算出小猫首次接种疫苗的最佳年龄，同时要记住，一窝小猫中的每只小猫会吮吸不同量的初乳。

结论