感染FIV和未感染FIV的猫对猫血支原体和血巴尔通体感染的急性期反应

Important Tips：

血支原体感染后使用SAA进行诊断最优。

血支原体导致贫血会比巴尔通体严重，可能需要输血处理。

原文地址：doi:10.1016/j.tvjl.2011.12.009

摘要：

猫血支原体的致病性因‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ (CMhm) 引起亚临床感染而异，而 Mycoplasma haemofelis (Mhf) 常诱发溶血性贫血。本研究的目的是描述猫对实验性感染 Mhf 或 CMhm 的急性期反应 (APR)，并确定慢性猫免疫缺陷病毒 (FIV) 感染是否会影响这种反应。急性期蛋白血清淀粉样蛋白 A (SAA)、触珠蛋白 (Hp) 和 a-1-酸性糖蛋白 (AGP) 浓度在感染前和感染后每 7-14 天测量一次，直至感染后第 100 天 (pi)使用 Mhf 或 CMhm。每组猫中有一半 (6/12) 慢性和亚临床感染 FIV。感染 Mhf 的猫在感染后第 16-44 天给予马波沙星治疗，感染 CMhm 的猫在感染后第 49-77 天给予半数马波沙星治疗。

当分别感染 CMhm 和 Mhf 时，FIV 感染的动物的 AGP 浓度显着降低，而 Hp 浓度显着高于未感染 FIV 的猫。CMhm 和 Mhf 感染都与 SAA 浓度的显着增加有关，而 AGP 浓度仅因 Mhf 感染而显着增加。感染 Mhf 的猫的 SAA 浓度明显高于感染 CMhm 的动物。Mhf 和 CMhm 感染都与 APR 相关，Mhf 感染会引起更大的反应。慢性 FIV 感染似乎会改变 APR，这会随着感染的血支原体种类而变化。

关键词：猫、急性期蛋白、猫支原体、血巴尔通体、猫免疫缺陷病毒。

01

Introduction

介绍

猫血支原体是嗜血性支原体细菌。血红支原体 (Mhf) 是最具致病性的，通常会在免疫功能正常的猫中诱发溶血性贫血，而‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ (CMhm，血巴尔通体) 和‘Candidatus Mycoplasma turicensis’通常不会引起贫血，除非同时存在疾病或免疫抑制。亚临床携带者状态也存在，并且感染的存在并不能证实血胞浆菌病是临床症状的原因。

急性期反应（APR）是先天免疫反应的一部分，以血清急性期蛋白（APP）浓度的变化为特征，可作为诊断和治疗的生物标志物。APPs 的测量广泛用于人类医学，人们对它们在伴侣动物中的使用越来越感兴趣，尽管迄今为止在猫身上进行的研究有限。据作者所知，唯一一项评估猫血胞浆菌病 APR 的研究报告称，六只实验性感染 Mhf 的动物的触珠蛋白 (Hp) 浓度升高。

本研究的目的是通过测量三种 APP、血清淀粉样蛋白 A (SAA)、触珠蛋白 (Hp) 和 a-1-酸性糖蛋白 (AGP) 的血清浓度来表征 Mhf 或 CMhm 实验性感染的 APR。还评估了慢性猫免疫缺陷病毒 (FIV) 感染对血支原体感染的 APR 的影响。

02

Materials and methods

材料和方法

学习规划

这项研究是在从先前研究中获得的血清样本上进行的。所有描述的程序和实验都是在1986年英国动物(科学程序)法案下批准的项目许可证下进行的。简而言之，这些研究使用了来自以下四组中的一组(每组6只)的24只无特定病原体(SPF)来源的猫：A组和B组感染CMHM，X组和Y组感染MHF，方法是从感染CMHM或MHF的供体猫身上输入2毫升肝素化血液IV。A组和X组慢性感染FIV(Glasgow8株)(23~32个月)。

在研究开始时，所有的猫都是临床正常的。每组随机选择3只猫，口服马博沙星(marbofloxacin)2 mg/kg，每天1次，共28天：感染CMHM的猫在感染后49-76天之间(猫数A2、A4、A5、B2、B3和B5)，MHF感染的猫在感染后16-43天之间(猫数X3、X5、X6、Y1、Y5和Y6)。治疗时机的不同反映了感染的不同时间进程：感染MHF的猫在感染过程中的早期治疗时出现贫血，而CMHM感染的猫在感染过程中亚临床感染的猫在感染过程的后期当CMHM拷贝数保持较高时得到治疗。

每组都接受马波沙星治疗，以评估每个猫对血支原体的反应。如果猫的PCV降到15%以下和/或动物表现出脱水的迹象，所有的猫都会接受皮下液体疗法(乳酸盐林格液)。在感染前(第0天)、感染后第9-44天(不包括感染后第30天)每周采集一次血清样本，然后每两周采集一次，直到感染后第100天。

急性期蛋白（APP）的检测方法

血清淀粉样蛋白 A 浓度使用用于人类的免疫比浊法测定并在猫中验证。α-1-酸性糖蛋白浓度是使用经验证可用于猫的快速免疫比浊法测定的。触珠蛋白（Hp）浓度使用市售试剂盒（Tridelta Development Ltd.）测定。首先测量 SAA 浓度，然后是 AGP 和 Hp 浓度，尽管血清量不足以分析所有样品中的所有 APP：在 A 组中，7 个样品未分析 Hp，3 个未分析 AGP；在 B 组中，四个样本没有进行 Hp 或 AGP 评估；在 X 组中，五个和两个样本分别没有进行 Hp 和 AGP 分析；在 Y 组中，一个样本未检查 Hp 或 AGP。

统计分析

将数据输入并在数据库（Excel 2008，Microsoft）中验证，然后导出到 SPSS 软件（18.0 版）中进行进一步分析。显着性设定为 P < 0.05。仅对治疗前测量的 APP 浓度进行统计分析，以确保治疗没有混杂效应。为了评估慢性 FIV 感染对血支原体感染的 APR 的影响，Mann-Whitney U 检验用于比较感染 FIV 和未感染 FIV 的动物之间的每个 APP 浓度，对于 CMhm 和 Mhf。为了评估每种感染对 APR 的影响，将感染后 APP 浓度的平均值（CMhm 分别为第 9、16、23、37 和 44 天，Mhf 分别为第 9 天和第 16 天）与感染前进行了比较。使用 Wilcoxon 符号秩检验的感染（第 0 天）值。传统的双尾测试用于评估 Hp 和 AGP 浓度的变化。

由于 SAA 感染前浓度低于检测限，因此使用单尾测试研究感染后 SAA 浓度变化。由于样本量小，这些分析是使用非参数测试进行的。使用 FIV 和 Haemoplasma spp 在感染后第 9-16 天对每个 APP 进行双向重复测量 ANOVA（CMhm 和 Mhf 均可用的预处理测量）。作为分组变量。该分析的残差令人满意地测试了正态性和方差同质性，证实了该测试的适用性。

03

Results

结果

慢性FIV感染对血支原体感染急性期反应的影响

预先存在的 FIV 感染对 CMhm 或 Mhf 感染后的 SAA 浓度、CMhm 感染后的 Hp 浓度或 Mhf 感染后的 AGP 浓度没有显着影响（表 1）。因此，CMhm 感染（A 组和 B 组）和 Mhf 感染（X 组和 Y 组）猫的 SAA 浓度数据、CMhm 感染（A 组和 B 组）猫的 Hp 数据以及 Mhf- 感染的 AGP 数据将感染的（X 组和 Y 组）猫组合起来进行进一步分析。

然而，FIV 感染确实会影响 Mhf 感染后的 Hp 浓度，感染 FIV 的猫的 Hp 浓度明显高于未感染 FIV 的动物（表 1）。FIV 感染也会影响 CMhm 感染后的 AGP 浓度，感染 FIV 的猫的 AGP 浓度明显低于未感染 FIV 的动物（表 1）。因此，分别分析了感染 Mhf 的猫（X 组和 Y 组）中的 Hp 浓度和感染了 CMhm 的猫（A 组和 B 组）中的 AGP 浓度。

图 1. A、B、X 和 Y 组的实验设计示意图。针对感染后 (pi) 的天数指示方案。显示了每组的 FIV 感染状态和平均堆积细胞体积 (PCV) (虚线表示参考区间)。实线箭头，IV 接种血浆菌属；*采样时间；阴影框，马波沙星给药（显示治疗猫的身份）。

表格1.

对每种感染性血支原体属的数据进行统计分析。对于每种急性期蛋白 (APP)，分别比较未感染 FIV 和感染 FIV 的猫以及感染前（第 0 天）和感染后的猫。每个 APP 都给出了参考区间。统计上显着的结果以粗体突出显示，每组的中位数（和范围）测量值。对于每个 APP，在 FIV 感染和非 FIV 感染的猫之间没有发现显着差异，将数据合并以比较血支原体感染前后的数据。

a 血清淀粉样蛋白 A 的检测下限为 0.38 mg/L。

血支原体感染对血清淀粉样蛋白 A 浓度的影响

 CMhm 感染后直到感染后第 44 天，7/12 只猫的 SAA 浓度升高（图 2A），在感染后第 16 天或第 23 天达到峰值浓度。与第 0 天相比，平均 SAA 浓度在感染后第 44 天显着升高（表 1），但在感染后第 44 天，就在马波沙星之前，除一只感染 CMhm 的猫外，其他所有猫都恢复到基线水平治疗。到感染后第 58 天，这只猫 (B1) 中的血清淀粉样蛋白 A 浓度已恢复到基线水平。在 11/12 Mhf 感染的猫中检测到 SAA 浓度增加（图 2B），浓度在感染后第 9 天左右达到峰值。与第 0 天相比，平均 SAA 浓度在感染后第 16 天显着升高（表 1）。

在一些感染 Mhf 的猫（例如 X6 和 Y6）中，马波沙星治疗与 SAA 浓度降低有关，但在其他猫（例如 X5 和 Y1）中，这种 APP 的浓度在治疗前开始降低。在感染后第 16 天，双向 ANOVA 未检测到 FIV 和血支原体感染对 SAA 浓度的交互作用（F = 3.122，P = 0.092），但感染 Mhf 的猫的平均 SAA 浓度显着升高（27.05 ± 0.4 mg/L) 与 CMhm 感染的动物 (0.94 ± 0.4 mg/L) (F = 31.706, P < 0.001) 相比。FIV 感染状态没有显着影响（F = 0.790，P = 0.385）。

血支原体感染对结合珠蛋白浓度的影响

 在感染后第 23 天，10/12 CMhmin 感染的猫的 Hp 浓度发生了不同程度的增加，但与第 0 天的值相比，平均浓度在感染后第 44 天没有显着差异（图 3A；表 1）。到感染后第 49 天开始马波沙星治疗时，8/12 的 CMhm 感染猫的 Hp 浓度已经下降。感染 Mhf 的动物在感染后第 9 天表现出与基线水平相比 Hp 浓度增加和减少（图 3B 和 C）。与第 0 天相比，非 FIV 感染猫和 FIV 感染猫在感染后第 16 天的平均 Hp 浓度没有显着差异（表 1），尽管在 FIV 感染中观察到 Mhf 感染后 Hp 浓度下降的趋势猫。触珠蛋白浓度从感染后第 16 天开始下降，到感染后第 23 天，大多数猫的浓度低于感染前的水平。马波沙星治疗并没有增加这种下降速度。双向 ANOVA 显示没有显着性差异：感染 Mhf 和 CMhm 的猫在感染后第 16 天之间的 Hp 浓度差异（F = 0.745，P = 0.404）； FIV 状态的影响（F = 3.56，P = 0.082）；这些因素之间相互作用的影响（F = 3.178，P = 0.098）。

图 2. 说明血清淀粉样蛋白 A (SAA) 浓度随时间变化的图表：(A) FIV 感染（A 组，实线）和非 FIV 感染（组B，虚线）猫。在感染后第 49-77 天，将马波沙星给予一定比例的动物（以开放标记表示）；(B) FIV 感染（X 组，实线）和非 FIV 感染（Y 组，虚线）猫的血吸虫支原体 (Mhf) 感染后。在感染后第 16-44 天，将马波沙星给予一定比例的动物（由开放标记表示）。阴影面板代表猫中 SAA 浓度的参考区间。

图 3.（左） 说明血清结合珠蛋白 (Hp) 浓度随时间变化的图表：(A) FIV 感染（A 组，实线）和非 FIV 感染（B 组）的“Candidatus Mycoplasma haemominutum”（CMhm）感染后，虚线）猫。在感染后第 49-77 天，将马波沙星给予一定比例的动物（以开放标记表示）；(B) 在感染 FIV 的猫（X 组，实线）感染血吸虫支原体 (Mhf) 后。在感染后第 16-44 天，将马波沙星给予一定比例的动物（以开放标记表示）；(C) Mhf 感染未感染 FIV 的猫后（Y 组，虚线）。在感染后第 16-44 天，将马波沙星给予一定比例的动物（由开放标记表示）。阴影面板代表猫中 Hp 浓度的参考区间。

图 4. 显示血清 a-1-酸性糖蛋白 (AGP) 浓度随时间变化的图表：(A) 感染 FIV 的猫感染‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ (CMhm) 后（A 组，实线）。在感染后第 49-77 天，将马波沙星给予一定比例的动物（开放标记）；(B) CMhm 感染未感染 FIV 的猫后（B 组，虚线）。在感染后第 49-77 天，将马波沙星给予一定比例的动物（开放标记）；（C）FIV感染（X组，实线）和非FIV感染（Y组，虚线）猫的血吸虫支原体（Mhf）感染后。在感染后第 16-44 天，将马波沙星给予一定比例的动物（开放标记）。阴影面板代表猫中 AGP 浓度的参考区间。

血支原体感染对α-1-酸性糖蛋白浓度的影响

 在感染后第 44 天，与第 0 天的值相比，CMhm 感染与 FIV 感染或非 FIV 感染的猫的 AGP 浓度没有显着差异（图 4A 和 B；表 1）。在整个研究过程中，在治疗和未治疗的感染 CMhm 的猫中都发生了 AGP 浓度的小幅波动，其中大部分变化出现在非 FIV 感染的猫中，直到 CMhm 感染后第 23 天。 Mhf 感染与不同的 AGP 浓度相关，具有明显的不同峰值和波动，并且一只猫 (Y2) 在感染后第 23 天出现该 APP 浓度的显着升高（图 4C）。与第 0 天相比，在 Mhf 感染后第 16 天记录到显着更高的平均 AGP 浓度（表 1）。双向 ANOVA 未显示感染 Mhf 和 CMhm 的猫在感染后第 16 天之间的 AGP 浓度存在显着差异（F = 3.809，P = 0.07），尽管接近了显着性，感染 Mhf 的猫表现出更大的 AGP浓度 (0.368 ± 0.063 g/L) 比他们的 CMhm 感染队列 (0.170 ± 0.052 g/L)。尽管检测到 FIV 状态的显着影响（F = 14.86，P = 0.002），但交互效应被建模，但未发现显着（F = 1.84，P = 0.195）。

04

Discussion

讨论

据作者所知，这是第一项全面评估猫感染血支原体的 APR 的研究。鉴于分析的血清是在先前调查血浆/慢性 FIV 感染的研究中获得的（Tasker 等人，2006a，b），并发的全身性病毒感染可能对我们的结果产生混淆影响。已显示 AGP 的聚糖部分在亚临床和终末感染 FIV 的猫中被修饰（Pocacqua 等，2005）。在本研究中，与非 FIV 感染的动物相比，在 CMhm 感染后，FIV 感染的 AGP 浓度较低，而与 Mhf 感染的非 FIV 感染的猫相比，FIV 感染的 Hp 浓度较高。然而，虽然这些结果具有统计学意义，但每组猫的测量值仍保持在参考区间内，并且每组的数量都很少。这些结果与 Duthie 等人的结果相反。(1997)，其中 APP 在单个时间点对六只患有终末期 FIV 相关疾病的猫进行测量。这项研究发现，5/6 和 4/6 猫的 AGP 和 Hp 浓度分别高于参考区间。

在病毒感染猫冠状病毒的急性期发现 AGP 显着增加，尽管尚未描述急性或慢性病毒感染后 APP 的减少。在人类免疫缺陷病毒 (HIV) 感染患者中，与未感染 HIV 的对照组相比，许多 APP（例如 C 反应蛋白 [CRP]、Hp 和纤维蛋白原）含量较高。APP，尤其是 CRP 浓度的升高与艾滋病患者的死亡率和机会性疾病（如 Pneumocystis jirovecii 肺炎）增加有关。CRP 不是猫 APR 的一部分，据作者所知，没有研究比较 HIV 和 FIV 感染之间的 APR。在当前研究中，从猫在 FIV 感染前和感染后立即采集的血清样本无法用于分析，并且超出了本研究的范围。

在两种血支原体感染后观察到 SAA 浓度升高。到感染后第 16 天，在大多数猫中很明显，正如之前在患有泌尿道疾病和手术后的猫中所描述的那样。SAA 浓度通常在感染后第 44 天恢复到接近感染前的值，这与自限性 APR 一致，尽管循环血浆拷贝数持续存在。这一发现表明，感染血支原体的猫的 SAA 浓度升高表明急性（<44 天后暴露）感染，而不是慢性感染。Mhf 感染与 SAA 浓度显着高于 CMhm 感染相关，这与 Mhf 更具致病性一致。先前已在这些猫中评估了血液学变量，感染 10/12 Mhf 的猫在感染后第 14 天发展为再生性大红细胞、低色素性溶血性贫血。

到感染后第 9 天，在这些动物中观察到的 SAA 迅速增加，因此反映了贫血的发展。虽然 Mhf 感染与 SAA 浓度显着高于 CMhm 感染相关，但后者也与 SAA 显着增加有关，证实 CMhm 诱导 APR，尽管幅度较低。事实上，发现 CMhm 感染会导致所有猫的 PCV 降低，但只有三分之一的动物会降低到贫血的程度。SAA 的浓度也与猫胰腺炎的疾病严重程度相关，其中降低反映了临床改善。在目前的研究中，当 APR 达到最大值和/或临床症状明显时没有进行治疗这一事实可以解释 SAA 浓度与所发现的治疗之间缺乏关联。

CMhm 或 Mhf 感染后，触珠蛋白浓度没有显着变化，CMhm 和 Mhf 感染之间该生物标志物的浓度也没有显着差异。在 FIV 感染的猫中观察到 Mhf 感染后 Hp 浓度降低的趋势，这可能是因为循环 Hp 与血红蛋白复合，导致溶血期间 Hp 的短暂降低，正如先前在实验感染猫中报道的那样。仅在感染 FIV 的猫中发现这种情况的原因仍然未知，并且 FIV 感染与并发 Mhf 感染后更严重的溶血无关。

本研究的回顾性导致了许多局限性：血清样本量不足以促进对所有样本中所有三种 APP 的分析；统计功效和个体反应差异的消除受限于每组中相对较少的动物数量（如果比较治疗和未治疗的猫，这个数量将进一步减少）和 Mhf 和 CMhm 感染的治疗期猫是不同的，这限制了对两种感染血支原体属之间差异的统计分析。在 APR 最大时（例如每天直到感染后第 30 天），在急性感染期间更频繁的采样可能通过促进每日统计比较提供了更大的统计能力。相反，由于在此期间记录的数据点很少，因此对每种感染性血支原体感染后的平均 APP 浓度进行了统计分析。最后，自然发生的 FIV 和血支原体属猫的 APR。感染可能与我们实验感染的动物不同。在这种情况下，疾病传播和/或接触其他病原体的差异可能很重要。

尽管并非所有数据都进行了统计分析，但本研究仍然为血支原体感染和抗生素治疗后 APP 的长期变化提供了有价值的信息。

05

Conclusions

结论

这项研究表明，尽管致病性不同，Mhf 和 CMhm 都与感染猫的 APR 有关。尽管 APP 是炎症和感染的非特异性指标，但它们的测量可能有助于区分急性/临床与慢性/亚临床血支原体感染。在这种情况下，SAA 被发现具有特别的前景，因为 Mhf 感染后的上升幅度高于 CMhm 感染，并且在感染的急性期后迅速恢复到基线水平。

Conflict of interest statement

利益冲突声明

本文的所有作者均未与可能不适当地影响或偏向本文内容的其他人或组织存在财务或个人关系。

Acknowledgements

感谢

本研究中使用的样品是在 Wellcome Trust 资助的一项研究（授权号 077718）之后获得的。R.K.得到了猫科动物咨询局临床奖学金的支持。E.N.B.得到布里斯托大学研究生研究奖学金和辉瑞动物健康的支持。

• 文中提及脱水或压积小于15%的动物会使用液体疗法（乳酸林格），但未提及输血，就实验而言理论上是没有进行输血，因为会对压积造成影响，影响实验结果，但非临床治疗手段。                

• 文章其实是因为临床上很多流浪猫会有未知原因贫血，所以找资料找到的文章，大家如果有遇到确诊的流浪猫贫血，不妨在留言区留言，分享一下自己的治疗方案。                  

• 流浪猫贫血大多都按照多西环素缺乏症（大嘘）进行处理，但是未能成功管理的，还是建议做进一步检查，如贫血四联PCR。