为了检查细菌感染是否是引起动物疾病的原因,兽医需要通过细菌培养来识别特定的病原体。确定最佳的治疗方案,提高患病动物康复的机会,同时免除不必要的风险。
因此微生物送检是控制感染的基础
那么下面让我们跟随一个病例的诊断流程,来看看一份看似简单的微生物报告,背后都有哪些关键的诊断步骤?
医院:一只6岁的健硕的大胖橘,他最近突然出现流鼻涕、鼻塞、打喷嚏等上呼吸道感染的症状,兽医怀疑有细菌感染。兽医选择采样送检,开启了大橘的美妙的微生物实验室检测之旅~
实验室:收到了大橘的样本后,对样本进行了:
直接镜检,发现镜下有炎性细胞内存在G-杆菌吞噬伴细胞外周边伴行(送检指征)。因此选择基础营养培养基和选择性培养基等对样本进行接种。然后将培养基放到含5%二氧化碳的微生物培养箱种培养24h。
我们来看看培养基上生长了几种菌呢?四种!
针对这么多种细菌的生长,都需要进行鉴定和药敏吗?
1、分离纯化:务必要进行分离纯化,才能得出准确的鉴定结果。
分纯之后,我们得到了纯培养物,我们将四位“嫌疑人”均进行了分纯,从而继续我们的旅程~
2、菌种鉴定:各种致病菌对不同抗菌药物的敏感性不同,同一种细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性亦有差异;而由于抗菌药物的广泛应用所产生的选择性压力,使耐药菌株也随之增加。因此药物敏感性试验结果的正确与否与临床疗效的关系极为密切。
所以菌种鉴定是药敏试验前的一步关键的试验!
实验室使用梅里埃微生物质谱鉴定系统将分纯的四种细菌,均通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术进行了菌种鉴定,鉴定结果如下:
通过质谱,我们拿到了四种细菌的结果:
1、少酸链球菌;2、铜绿假单胞菌;3、嗜麦芽窄食单胞菌;4、多杀巴斯德菌。
那么这四种哪种细菌是致病菌呢?需要选择哪种细菌进行药敏试验呢?
通过对定植菌排除、流行病学调查、致病性分析、耐药性的严重程度等因素的综合评价,同时结合样本直接镜检结果,我们锁定了两株必须要做药敏试验的“嫌疑人”:多杀巴斯德和嗜麦芽窄食单胞菌
“锁凶”后,我们要进行最后的一步,也是最为关键的一步了:
3、药敏试验
不论采用哪种药敏试验方法,均需根据相关的标准文件(如CLSI美国临床和实验室标准协会或EUCAST欧盟药敏试验标准等),有依据的、科学的进行药敏试验。
标准文件中规定了不同菌种的药敏试验方法(该菌使用MIC还是KB方法)、药物选择、折点规定、耐药表型的确认试验、药敏试验质控方法等等。
于是,我们参考了CLSI-VET01S版本、补充参考CLSI-M100版本,对大橘检出的两株致病菌,进行了药敏试验。方法学选择了梅里埃VITEK2-COMPACT 的兽医专用的微量肉汤稀释法MIC结合纸片扩散法KB方法,结果如下:
值得注意的是:对嗜麦芽窄食单胞菌来说,复杂的耐药机制就宣告着大多数药物均为天然耐药,文件中仅有三个药物有参考的标准范围,即米诺环素、左氧氟沙星、复方新诺明。
最后,我们根据CLSI出具了一份“简单”的报告: