153-2012-0258
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Abstract
概述
猫冠状病毒(FCoV)属于Alphacoronavirus 属、冠状病毒亚科、冠状病毒科。根据刺突(S)蛋白的氨基酸(aa)序列和抗体中和作用的差异，FCoV 分为两种血清型（I和II）。此外，FCoV 有两种不同的生物型：猫肠道冠状病毒（FECV：无毒 FCoV）和猫传染性腹膜炎病毒（FIPV：强毒 FCoV）。抗病毒抗体增强了某些病毒感染（包括 FIP）的病毒载量和疾病严重程度。这种现象被称为病毒感染的抗体依赖性增强 (Antibody-dependent enhancement，ADE)。FIPV 感染的 ADE 可由亚中和水平的抗 FIPV S 抗体的存在诱导。与登革热病毒感染不同，FIPV的ADE是由相同血清型病毒的再次感染引起的。
FECV主要通过猫的口腔途径传播，但尚不清楚 FIPV是否通过口腔感染途径在猫与猫之间传播。猫FIP的发病概率可能与FIPV的感染途径有关。腹膜内和口鼻接种 I 型 FIPV UCD4 毒株的猫的 FIP 发生率分别为 37.5% 和 0%。另一项研究描述了口服接种 I 型 FIPV KU-2 株 (FIPV-I KU-2) 不会导致猫 FIP，但皮下和腹膜内接种 FIPV-I KU-2 可导致FIP。本研究中，作者证实了口服接种 FIPV-I KU-2 有50%可能会导致使用抗FIPV-I KU-2抗体被动免疫的猫发生 FIP，并且可以使用猫巨噬细胞在体外促进 I 型 FIPV 感染的 ADE。
本研究由北里大学兽医学院，十和田在2019年发表于《JOURNAL OF VETERINARY MEDICAL SCIENCE》（SCI三区，IF=1.336）。
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Result
结果
5-6月龄猫，三只注射感染FIPV-KU-2健康猫的血清（ab1-3），一只注射感染FIPV-KU-2猫纯化后的腹水IgG（ab4）。血清 IgG 和纯化 IgG 中，针对 FIPV-I KU-2 的中和抗体滴度均为 1:320。猫在被动免疫后3天口服接种FIPV-I KU-2（104.3TCID50/头）。作为对照，三只未进行被动免疫的猫接种了病毒（c1-3）（图 1A）。
一只注射血清抗体和纯化IgG的猫分别在感染后15d和18d被安乐死，两者表现出明显的FIP感染特征，发热 (>39.5°C)、嗜睡、厌食和黄疸，并在死亡后剖检发现腹水。感染 FIPV 后无临床症状的被动免疫猫在肠道内观察到数个 1-2 毫米的结节，但没有其他病变。在没有被动免疫的情况下口服接种 FIPV-I KU-2 的猫没有出现临床症状。图 1B 显示了感染 FIPV-I KU-2 的猫的存活率。接受被动免疫的猫存活率低于未接受被动免疫的猫，感染FIPV-I KU-2后的平均存活时间也较短。
对猫测试了针对 FIPV-I KU-2 的中和抗体（NT）水平。在接受被动免疫的猫中，NT 在病毒接种当天（被动免疫后第 3 天）增加到 4-32 倍（图 2A）。除了在病毒攻击后发展为 FIP 的 2 只猫之外，NT 在猫中保持在恒定水平。在没有被动免疫的猫中，NT 在接种 FIPV-I KU-2 后 12 天开始增加，并在接种后 36 天达到 64-128 倍（图 2B）。使用纯化的可溶性 FIPV 抗原通过 ELISA 研究血清抗 FIPV 抗体水平的时程变化。在猫的被动免疫中，ELISA OD 值在病毒接种当天（被动免疫后第 3 天）增加到 0.2–0.8。与 NT 滴度一样，ELISA OD 值在 2 只猫中持续增加，不包括 2 只患 FIP 的猫（Ab2 和 Ab4；图 2C）。在没有被动免疫的猫中，ELISA OD 值在接种 FIPV-I KU-2 12-18d 后持续增加，并在 24-30 d时达到 1.2-1.7（图 2D）。对猫的直肠拭子样本进行了针对 FCoV N 基因的 RT-PCR。在被动免疫的猫中，在 Ab3 中接种病毒后第 15 天检测到 FCoV N 基因，但在其他猫的任何样本中均未检测到 FCoV N 基因（表 1）。
在仅用从 FIPV-I KU-2 感染猫的腹水中纯化的 IgG 处理的巨噬细胞中未检测到 FCoV N 蛋白（图 3A）。在仅用 FIPV-I KU-2 处理的巨噬细胞中，在 3.9 ± 2.5%（平均值 ± S.D.）的细胞中检测到 FCoV N 蛋白（图 3B）。在用纯化的 IgG 和 FIPV-I KU-2 处理的巨噬细胞中，在 35.9 ± 8.1%（平均值 ± S.D.）的细胞中检测到 FCoV N 蛋白（图 3C），表明 FIPV-I KU-2 感染率在抗体存在时巨噬细胞增加。
通常，当一只猫在多猫环境中发生 FIP 时，共同生活的猫也很有可能发生 FIP 。患有 FIP 的猫排出的 FIPV 可能会通过口腔途径感染其他猫，但口服接种的 I 型 FIPV却大多不会引起猫的 FIP，这些相互矛盾的事实未有具体阐释。然而，虽然FIPV 不通过口腔感染引起 FIP，也可能在抗 I 型 FCoV 血清反应阳性的猫中引起 FIP。但并非所有抗 FIPV 血清反应阳性的猫都会发展为 FIP。例如，抗 FIPV 中和抗体水平高的猫不会促进ADE，病毒会被中和。当 FIPV 感染后强烈诱导细胞免疫时，FIP 也不会发展 。基于这些发现，为了阐明FIP的临床状态，有必要分析病毒感染后猫的免疫状态。然而，最近许多关于 FIP 的研究并不关注宿主，而是关注病毒。作者认为FIP是一种涉及多种危险因素（FCoV毒力、宿主免疫状况、病毒感染途径等）的“多病因疾病”。本研究可能为理解口腔病毒感染引起ADE的机制提供平台。
编者：代
