新品发布 | BRAF基因突变检测助力犬移行细胞癌早期筛查及诊断

犬移行细胞癌（Canine Transitional Cell Carcinoma，简称cTCC）是犬膀胱内发生的一种常见恶性肿瘤，也称为尿路上皮癌。它是犬中最常见的下尿路肿瘤，多发生在中老年雌性犬身上，约占所有犬肿瘤病例的2%。在美国，每年大约有20,000只狗被诊断出移行细胞癌，由于肿瘤位置常发生于膀胱的三角区域，完整的手术切除往往较为困难，而且常常会导致患犬出现部分或完全的排尿障碍。

患有移行细胞癌的犬常出现与膀胱、尿道或前列腺肿块生长相关的临床症状，包括尿中带血、排尿疼痛、排尿频率增加，严重时可导致尿道阻塞，出现尿流减少或尿不出；随着疾病进展，癌细胞通常会局部扩散，并转移到身体其他部位，如盆腔淋巴结、肺和骨骼。就诊时，20%的肿瘤已经发生转移，因此，对疑似移行细胞癌的犬进行早期筛查及诊断是至关重要的。

对怀疑移行细胞癌犬的常规检查包括血液分析、尿液分析、胸部X光片、腹部超声以及尿液培养。而移行细胞癌的确诊则依赖于对组织活检的组织病理学分析，该组织活检是通过膀胱镜检查，手术或导管获得的。然而，通常不推荐使用超声引导活检，因为这很容易导致肿瘤进一步的扩散。

BRAF是RAF家族的重要成员，在MAPK/ERK通路中发挥关键作用。BRAF基因致癌突变会永久激活MAPK激酶途径，导致肿瘤的发生。研究显示，大约85%的犬移行细胞癌病例中存在BRAF基因V595E突变，通过无创尿液采集，可以对BRAF进行基因检测，这为早期诊断和筛查犬移行细胞癌提供了可能。

目前，实验室进行BRAF基因检测的方法主要有一代测序（Sanger测序法）、实时荧光定量PCR（qPCR）、数字PCR（ddPCR）的方法，每种方法各有优缺点。

(1) 一代测序法（Sanger测序法）

可检测已知和部分未知突变。但该方法灵敏度不高，突变等位基因需要超过10%才能检出；对样本要求较高，一般要求肿瘤细胞含量不低于50%，如果低于50%，则假阴性出现的概率会显著增加；不适用于活检、细胞学或血液样本。

(2) 实时荧光定量PCR（qPCR）

操作简单、报告周期短、灵敏度高、结果判读易标准化，是人类肿瘤基因突变检测常用方法。该方法具有目标特异性，但无法检测未知突变。

(3) 数字PCR（ddPCR）

高灵敏性、特异性，可检测复杂背景下的靶标序列。该方法只能检测已知的有针对性的突变，虽然不依赖标准曲线，但是每次反应之间存在差异，短期内不能代替qPCR，也不能代替其他金标准而作为首选方法。目前仅用于科研用途，ddPCR走向临床检验还需要时间。

肿瘤基因检测方法技术比较

元医实验室引入BRAF肿瘤基因突变检测技术，通过先进的荧光定量PCR方法，为犬肿瘤BRAF基因进行深度检测，可在表型出现之前更早地洞察肿瘤基因的微妙变化，为犬移行细胞癌早期筛查及诊断提供更为精准的医疗解决方案。