在意大利报告了2只反复暴露于同一淡水栖息地的犬的腐皮病。系统分析将分离株置于隐皮腐菌复合体簇IV中，对应于Pythium periculosum。在意大利，人类和兽医卫生专业人员在进行鉴别诊断时应考虑到腐皮病。
于2022年10月(病例1)和2023年1月(病例2)评估了2只无亲缘关系的犬的软组织肿胀，这2只犬分别居住在意大利中部罗马省(相距30 km)(图1)。这些动物在皮损发生前从未出过意大利，其他方面健康。我们收集了病史和临床表现资料。图1 意大利2只犬的皮肤股骨头增生的临床表现。A, B)病例1，显示右胁部的一个大肿块(A)，左腋窝的一个大肿块和左前肢第一指的一个较小的溃疡病变(B)。C, D)病例2，显示斑块的详细图像(C)和犬的侧位图显示胸部和大腿上的两个斑块(D)皮损穿孔活检的组织病理学结果显示，多灶性至融合的(脓)肉芽肿性、嗜酸性皮炎和脂膜炎，伴有皮损内不规则分支状菌丝(图2，图A)。菌丝Grocott六胺银染色呈阳性，呈深棕色(图2，图B)，而过碘酸希夫染色呈阴性。在含氯霉素和庆大霉素的沙伯氏葡萄糖琼脂(真菌)上培养，结果均为阴性。
图2 2只犬皮肤皮损的组织学分析。A)皮肤肿块穿孔活检切片显示融合性化脓性肉芽肿和嗜酸性肉芽肿，真皮深层和脂膜中央坏死。苏木精-伊红染色;原始放大×100。B)皮肤肿块穿刺活检切片，可见宽而不规则的分枝状菌丝。格罗考特六胺银染色;原始放大×400。C)病例2中发现的肿块穿刺物的培养(24小时)。抽吸物在无抗菌药物的沙堡葡萄糖琼脂上培养，菌落呈浸没状，无色，呈不规则放射状。D)菌落的显微镜外观，显示宽(直径4-10 μm)、透明和稀疏的间隔菌丝。原始放大×250。
为了获得明确的鉴定，使用核旋蛋白组织试剂盒(machery - nagel, https://www.mn-net.com)。我们使用引物对ITS4和ITS5对其内部转录间隔区(ITS)进行PCR扩增和测序(11)。我们获得了与GenBank中P. insidiosum ITS序列密切相关的相同序列(GenBank登录号为OQ532907[病例1]和OQ532908[病例2])(使用BLASTn进行比较，https://blast.ncbi.nlm.nih.gov)。使用MEGA11软件(https://www.megasoftware.net)对P. insidiosum复合体中属于不同簇的序列进行了比对。采用邻接法(1000个重复的bootstrap分析)进行系统发育分析；从感染犬的组织中获得的序列与腐霉菌组IV(附录图，https://wwwnc.cdc.gov/EID/article/29/7/23-0320- App1.pdf)聚为一簇，对应于新描述的P. periculosum。虽然需要进行环境研究来确认，但罗马附近的Bracciano湖可能是感染源。这两只犬经常在湖里游泳，湖里有大量的死水，在较热的月份，稳定的温度约为30°C，已知这些特征支持致病性腐菌的生长。通过细针穿刺从病例2的病变处收集其他材料。我们怀疑由于补充了氯霉素，该微生物在之前的培养中未能生长。因此，我们将抽吸物在37℃无补充的Sabouraud葡萄糖琼脂上培养。经过24小时的培养后，从抽吸的材料中形成了具有不规则辐射模式的无色菌落(图2，图C)。显微镜下，菌丝宽(直径4~10 μm)，透明，有稀疏间隔(图2，图D)。通过应用于活检的相同分子方法，菌落被鉴定为P. periculosum。病例表明，发生腐皮病的地理分布比以前认识的更广泛，这与经典热带和亚热带地区以外(如靠近加拿大边境的美国地区以及西班牙、以色列、日本和韩国)的其他报告一致。由于温带的平均气候条件似乎不适合致病卵菌的生命周期，这些地区的病例可能发生在有限的生态位中。我们的报告阐明了这一概念；意大利中部主要是地中海气候，冬季温和，有时多雨，夏季阳光充足，炎热，通常干燥。这些特征不符合更容易发生股骨头增生的区域的描述。然而，我们怀疑这些犬被感染的区域具有感染腐皮病风险区域的特征(温暖、潮湿的环境)。在非流行地区，越来越多的冷热病报告可能表明，由于全球气候变化，致病的卵霉菌数量增加。另一种解释是，由于卫生保健人员的认识提高和诊断工具的可用性，更多的病例被识别和公布。我们需要通过环境和临床研究来阐明这些假设。
本报告中的犬显示了与皮肤型腐皮病相关的典型体征，包括随着时间的推移发展为多个肿块或真皮斑块。犬的胃肠道股骨头增生症是另一种以体重减轻、呕吐、腹泻和便血为特征的疾病。
与地理来源相关的遗传变异存在于P. insidiosum复合体内的物种中。P. insidisum 组 I主要分布于美洲，而P. insidisum 组 II通常分布于亚洲和澳大利亚。P. periculosum 组 III主要在美国报道，并且与组 I的成员同域。在我们的病例中发现的基因型(P. periculosum 组 IV)似乎有更广泛的分布。大多数人类病例报告来自泰国和印度。然而，也从巴西和美国的环境样本以及以色列和西班牙的人类患者中发现了P. periculosum 组 IV，这一发现值得关注，因为西班牙与意大利距离很近。
总之，从“同一个健康”的角度来看，我们的研究表明，环境中存在一种意想不到的外来病原体，可能会感染气候温和的国家的人类。在意大利，人类和兽医保健专业人员现在应将腐皮病视为一种鉴别诊断，特别是在有接触淡水生境历史的情况下。
MY-OPINION：少去河沟游泳，虽然很“自由”；小小病灶培养、活检还是很值得的。
